透射式熒光顯微鏡:
透射式熒光顯微鏡由汞燈發(fā)出的各種譜線的光線,經激發(fā)濾光片后只讓某一種波長的紫外光線通過,如波長為404.7nm藍紫光,經反光鏡后,激發(fā)樣品產生熒光。這個濾光片將其它波長的光線濾掉,并使樣品激發(fā)熒光,所以稱激發(fā)濾光片。
通常,熒光波長比激發(fā)樣品的光的波長大得多,是可見光。這樣產生的熒光和透過樣品的一部分激發(fā)光(紫外光),經物鏡成像后,人眼即可用目鏡觀察熒光圖像。為了防止紫外光進人目鏡視場,降低圖像材度和損傷人眼,安放了一塊截止濾光片,它只讓某一部分波長的譜線通過,如只讓500~750nm的可見光通過,而不讓500nm以下的光通過,所以稱為截止濾光片。
反射式熒光顯微鏡:
反射式熒光顯微鏡和透射式熒光顯微鏡的原理類同。
反射式熒光顯微鏡有下列優(yōu)點:
①光能的利用率高。在反射式熒光顯微鏡中,激發(fā)光直接照射在標本的觀察表面;而在透射式熒光顯微鏡中,激發(fā)光穿過具有一定厚度的標本后才抵達觀察表面,能量被衰減。
②反射式熒光顯微鏡可以觀察不透明標本。所以現在大多采用反射式熒光顯微鏡。然而,實現反射熒光的技術難度較高,此技術隨著電子計算機的出現,薄膜技術的不斷發(fā)展才得以實現。實際反射式熒光顯微鏡中,激發(fā)、截止濾光片和半透分光鏡是做成一個濾光片組。