熒光是一種物理現(xiàn)象，其中特定的化合物在被另一種顏色的光照射后很快就會發(fā)出特定顏色的光。在本文中，我們簡要介紹了熒光物理學和現(xiàn)代熒光顯微鏡的設計要點。我們在實際意義上進一步討論了熒光染料以及了解它們的激發(fā)和發(fā)射光譜的重要性。除了熒光串擾引起的假陽性結果問題外，還討論了單熒光和多熒光應用中的適當過濾。

熒光是一種物理現(xiàn)象，其中特定的化合物在被另一種顏色的光照射后很快就會發(fā)出特定顏色的光。在本文中，我們簡要介紹了熒光物理學和現(xiàn)代熒光顯微鏡的設計要點。我們在實際意義上進一步討論了熒光染料以及了解它們的激發(fā)和發(fā)射光譜的重要性。除了熒光串擾引起的假陽性結果問題外，還討論了單熒光和多熒光應用中的適當過濾。

為了使樣品適合熒光顯微鏡檢查，它要是熒光的。有幾種創(chuàng)建熒光樣品的方法；主要技術是用熒光染料標記，或者在生物樣品的情況下，熒光蛋白的表達。或者，可以使用樣品的固有熒光。在生命科學中，熒光顯微鏡是一種強大的工具，它允許對樣本進行特異性和敏感的染色，以檢測蛋白質或其他感興趣的分子的分布。因此，生物樣品的熒光染色技術多種多樣。

熒光顯微鏡生物科學中的應用

生物熒光

許多熒光染料是為一系列生物分子設計的。其中一些是本質上具有熒光并結合感興趣的生物分子的小分子。其中主要的例子是核酸染色劑，如DAPI和Hoechst和 DRAQ5 和 DRAQ7，它們都與DNA的小溝結合，從而標記細胞核。其他是藥物、毒素或結合特定細胞結構并已用熒光報告分子衍生的肽。這類熒光染料的一個主要例子是鬼筆環(huán)肽，它用于染色肌動蛋白。哺乳動物細胞中的纖維。一種新的肽，稱為膠原雜交肽，也可以與熒光團結合，用于染色變性的膠原纖維。使用結合纖維素或果膠的染色劑或染料對植物細胞壁進行染色。對能夠對植物細胞進行活體成像的高特異性熒光探針的探索仍在進行中。

免疫熒光

免疫熒光是一種利用抗體與其抗原的高度特異性結合來標記細胞內的特定蛋白質或其他分子的技術。用對目標分子特異的一抗處理樣品。熒光團可以直接與一抗偶聯(lián)?；蛘撸梢允褂门c第Y抗體特異性結合的熒光團偶聯(lián)的第E抗體。例如，在識別微管蛋白的小鼠中產(chǎn)生的一抗與用熒光團衍生的二抗結合的抗小鼠二抗可用于標記細胞中的微管。

熒光蛋白

現(xiàn)代對遺傳學的理解和可用于修飾 DNA 的技術使科學家能夠對蛋白質進行基因修飾，從而也攜帶熒光蛋白報告基因。在生物樣品中，這允許科學家直接使感興趣的蛋白質發(fā)熒光。然后可以直接跟蹤蛋白質的位置，包括在活細胞中。